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bb贝搏平台登录入口 - 【研发速递】外泌体载药研发新突破-小RNA的新武器
加载中... 日期:2023-06-02

外泌体是细胞排泄到胞外的一种囊泡,巨细为30-150nm,携带了各类核酸、卵白质以及脂类等物资,可以在差别细胞间举行通报以及交流,从而影响受体细胞的生物学功效。外泌体在巨细以及功效上与合成的纳米颗粒近似,但作为自然内源性载体,具备免疫原性低、毒性低、不变性高、渗入性好等上风,故可能成为更有运用远景的药物递送载体。今朝,外泌体已经经乐成运载基因类药物、抗癌药物以及抗炎症药物等其他类型药物。最近几年来,外泌体作为基因载体引起了基因医治研究者的广泛存眷。与传统的病毒或者非病毒载体比拟,外泌体作为基因载体其上风包孕如下几点: 安全:从患者体内获取的外泌体,经载入基因后,再注入患者体内险些不会引起免疫反映,越发安全; 掩护性强:外泌体粒径较小,可以逃过网状内皮体系的捕获,有用掩护承载的基因; 运载效率高:外泌体可以经由过程与受体细胞膜交融的体式格局,将基因类药物开释到细胞质中。近期,以及元生物研发团队展示了他们在外泌体载药上的研发进展,别离用电转法以及共孵育法做了miRNA以及siRNA两部门装载的摸索。按照数据成果显示,比拟共孵育法,电转法能更有用地将miRNA以及siRNA这些小RNA载入到外泌体中,这为后续验证miRNA以及siRNA对于体表里功效的影响奠基了根蒂根基。下面详细先容试验历程以及成果。壹外泌体载药之miRNA装载篇图一 外泌体miRNA装载及检测示用意1.试验成果:1)外泌体超离后,按照透射电镜、NTA以及WB的鉴定成果,咱们得到了高质量的外泌体,用于后续电转以及共孵育试验。图二 外泌体鉴定2)外泌体经电转以及共孵育后,经由过程qPCR要领检测外泌体中miR-21-5p的程度,数据显示,电转后外泌体中miR-21-5p的程度显著高于共孵育后miR-21-5p的程度。图三 qPCR检测外泌体中miR-21-5p含量3)从转染的荧光成果来看,比拟空细胞组,外泌体电转mimic NC后转染入目的细胞中的荧光强度要较着高于外泌体与mimic NC共孵育后在目的细胞中的荧光强度,故mimics经由过程电转进入外泌体的效率要远高于经由过程共孵育进入外泌体的效率。图四 外泌体电转以及共孵育转染荧光对于比4)从检测目的细胞中miR-21-5p的RNA程度可以看出,与上述转染成果一致,经由过程电转法将miR-21-5p转载入外泌体中,再用此外泌体转染目的细胞,发明目的细胞中miR-21-5p RNA程度显著高于用共孵育法带来的RNA程度变化。图五 qPCR检测外泌体电转以及共孵育对于目的细胞中miR-21-5p RNA程度的影响2.试验会商:基于本次的试验数据,咱们可以看出,用电转法将miRNA转载入外泌体中是切实可行的,且效率要远高于用共孵育法。可是需要留意的是,差别批次差别来历的外泌体,其电转效率有差异,同时差别细胞摄入外泌体的能力差别,是以使用差别批次差别来历的外泌体电转时,需要做外泌体以及miRNA梯度预试验确定之外泌体以及miRNA的最好使用量。以及元生物可提供外泌体分散、透射电镜、纳米粒径阐发、WB标记物检测、外泌体流式检测、外泌体示踪、外泌体对于细胞功效学影响、外泌体动物打针、活体成像、病理等办事。贰外泌体载药之siRNA装载篇1.试验成果:1) 经由过程qPCR法检测电转组以及共孵育组外泌体中siRNA程度,数据成果显示,电转组的RNA程度显著高于共孵育组,注解siRNA经由过程电转进入外泌体的效率较高。图六 qPCR检测电转组以及共孵育组外泌体中siRNA程度2) 从细胞中外泌体的荧光环境看,电转组里除了了外泌体自己的绿色,另有Bcl-2 siRNA的红色标志,申明Bcl-2 siRNA经由过程电转被装载入外泌体中;而共孵育组中基本没有摄取Bcl-2 siRNA,故经由过程电转法能将siRNA有用地装进外泌体中。 图七 电转组以及共孵育组与细胞共造就24h后不雅察外泌体荧光环境3)经由过程共聚焦显微镜不雅察电转组外泌体中siRNA的载入环境,从共聚焦显微镜拍摄的成果看,电转组外泌体中有进入了年夜量的Bcl-2 siRNA。图八 共聚焦显微镜检测外泌体中siRNA装载环境 2.试验会商:经由过程本次试验数据可以看出,对于于siRNA的外泌体装载,电转法装载的效率较高。后续试验可以进一步检测细胞中siRNA引起的基因程度变化,和对于应的细胞功效学的变化。将来的试验成果,咱们拭目以待!接待对于外泌体载药感乐趣的教员们一路来切磋外泌体的载药效率、载药要领以及医治效果等。